甲氨蝶呤是一种抗叶酸类肿瘤药，主要用于各种急性白血病的化疗，特别是急性淋巴细胞白血病，也用于恶性淋巴瘤、肺癌、各种软组织肉瘤、乳腺癌、卵巢癌、宫颈癌、恶性葡萄胎、绒毛膜上皮癌、睾丸癌等肿瘤的治疗。小剂量甲氨蝶呤可用于治疗银屑病、自身免疫性疾病，如类风湿关节炎、强直性脊柱炎等。也可用于造血干细胞移植后的排异反应。