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葡萄糖氧化酶法
2020年07月01日
葡萄糖氧化酶法在日常生活中大多数人可能都没有听说过,其实葡萄糖氧化酶法是一种检验患者是否血糖高,是否患糖尿病的一种检查方法,一般比较广泛使用与医院,如果血糖高或者是糖尿病患者用葡萄糖氧化酶法来检测结果是非常准确的,下面具体介绍葡萄糖氧化酶法。
葡萄糖氧化酶法测量血糖浓度的详细介绍
【原理】
葡萄糖氧化酶(glucoseoxidase,GOD)利用氧和水将葡萄糖氧化为葡萄糖酸,并释放过氧化氢。过氧化物酶(peroxidase,POD)在色原性氧受体存在时将过氧化氢分解为水和氧,并使色原性氧受体4-氨基安替比林和酚去氢缩合为红色醌类化合物,即Trinder反应。红色醌类化合物的生成量与葡萄糖含量成正比。
【试剂】
1.0.1mol/L磷酸盐缓冲液(pH7.0)称取无水磷酸氢二钠8.67g及无水磷酸二氢钾5.3g溶于蒸馏水800ml中,用1mol/L氢氧化钠(或1mol/L盐酸)调pH至7.0,用蒸馏水定容至1L。
2.酶试剂称取过氧化物酶1200U,葡萄糖氧化酶1200U,4-氨基安替比林10mg,叠氮钠100mg,溶于磷酸盐缓冲液80ml中,用1mol/LNaOH调pH至7.0,用磷酸盐缓冲液定容至100ml,置4℃保存,可稳定3个月。
3.酚溶液称取重蒸馏酚100mg溶于蒸馏水100ml中,用棕色瓶贮存。
4.酶酚混合试剂酶试剂及酚溶液等量混合,4℃可以存放1个月。
5.12mmol/L苯甲酸溶液溶解苯甲酸1.4g于蒸馏水约800ml中,加温助溶,冷却后加蒸馏水定容至lL。
6.100mmol/L葡萄糖标准贮存液称取已干燥恒重的无水葡萄糖1.802g,溶于12mmol/L苯甲酸溶液约70ml中,以12mmol/L苯甲酸溶液定容至100ml。2h以后方可使用。
7.5mmol/L葡萄糖标准应用液吸取葡萄糖标准贮存液5.0ml放于100ml容量瓶中,用12mmol/L苯甲酸溶液稀释至刻度,混匀。
【临床意义】
1.生理性高血糖可见摄入高糖食物后,或情绪紧张肾上腺分泌增加时。
2.病理性高血糖
(1)糖尿病:病理性高血糖常见于胰岛素绝对或相对不足的糖尿病患者。
(2)内分泌腺功能障碍:甲状腺功能亢进,肾上腺皮质功能及髓质功能亢进。引起的各种对抗胰岛素的激素分泌过多也会出现高血糖。注意升高血糖的激素增多引起的高血糖,现已归入特异性糖尿病中。
(3)颅内压增高:颅内压增高刺激血糖中枢,如颅外伤、颅内出血、脑膜炎等。
(4)脱水引起的高血糖:如呕吐、腹泻和高热等也可使血糖轻度增高。
3.生理性低血糖见于饥饿和剧烈运动。
4.病理性低血糖(特发性功能性低血糖最多见,依次是药源性、肝源性、胰岛素瘤等)
(1)胰岛β细胞增生或胰岛β细胞瘤等,使胰岛素分泌过多。
(2)对抗胰岛素的激素分泌不足,如垂体前叶功能减退、肾上腺皮质功能减退和甲状腺功能减退而使生长素、肾上腺皮质激素分泌减少。
(3)严重肝病患者,由于肝脏储存糖原及糖异生等功能低下,肝脏不能有效地调节血糖。
【注意事项】
1.葡萄糖氧化酶对β-D葡萄糖高度特异,溶液中的葡萄糖约36%为α型,64%为β型。葡萄糖的完全氧化需要α型到β型的变旋反应。国外某些商品葡萄糖氧化酶试剂盒含有葡萄糖变旋酶,可加速这一反应,但在终点法中,延长孵育时间可达到完成自发变旋过程。新配制的葡萄糖标准液主要是α型,故须放置2h以上(最好过夜),待变旋平衡后方可应用。
2.葡萄糖氧化酶法可直接测定脑脊液葡萄糖含量,但不能直接测定尿液葡萄糖含量。因为尿液中尿酸等干扰物质浓度过高,可干扰过氧化物酶反应,造成结果假性偏低。
3.测定标本以草酸钾-氟化钠为抗凝剂的血浆较好。取草酸钾6g,氟化钠4g。加水溶解至100ml。吸取0.1ml到试管内,在80℃以下烤干使用,可使2~3ml血液在3~4天内不凝固并抑制糖分解。
4.本法用血量甚微,操作中应直接加标本至试剂中,再吸试剂反复冲洗吸管,以保证结果可靠。
5.严重黄疸、溶血及乳糜样血清应先制备无蛋白血滤液,然后再进行测定。
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