蛋白质是生活中比较重要的概念,因为食物当中充满了蛋白质,而且人体每天都需要大量的蛋白质来维持生命的运行,随着现代科学技术的进步,人们对蛋白质的研究越来越深入,出现了微观方面的蛋白质研究成果,例如,研究蛋白质相互作用就是一种比较重要的课题,下面就来看看蛋白质相互作用是什么呢?
蛋白质-蛋白质相互作用是指两个或两个以上的蛋白质分子通过非共价键形成蛋白质复合体的过程。
蛋白质与蛋白质之间的相互作用构成了细胞生化反应网络的一个主要组成部分,对调控细胞及其信号有重要意义。
蛋白质互作研究按照实验目的可分为两大类,一是验证两个蛋白是否存在相互作用,二是筛选某个兴趣蛋白的互作蛋白。
注意要点
(1)探针蛋白的本质与相互作用蛋白的来源:探针蛋白的本质:是全长蛋白、相互作用相关的结构域,甚至是化学合成的较小的生物活性片段。相互作用蛋白的来源:已知内源性表达探针蛋白的细胞系是寻找与其相互作用蛋白的理想实验材料。
(2)细胞裂解物的制备:成功制备细胞粗提物的关键因素包括:细胞的裂解方式;pH的控制;温度;避免蛋白的降解。这些都需要在预实验中多次重复来优化细胞裂解条件。提取重组蛋白有时不必破碎细胞。例如,许多高表达的哺乳细胞系(尤其是中国仓鼠卵巢细胞,CHO细胞)和酵母细胞株已经被改造得可以分泌重组蛋白,因而可以直接从细胞条件培养基和培养滤出液中纯化重组蛋白。使用这些方法很重要的一点是要尽可能快地浓缩大量的细胞条件培养基,使之尽快进入“无蛋白酶的环境”。
蛋白质-蛋白质相互作用是指两个或两个以上的蛋白质分子通过非共价键形成蛋白质复合体的过程。
蛋白质与蛋白质之间的相互作用构成了细胞生化反应网络的一个主要组成部分,对调控细胞及其信号有重要意义。
蛋白质互作研究按照实验目的可分为两大类,一是验证两个蛋白是否存在相互作用,二是筛选某个兴趣蛋白的互作蛋白。
注意要点
(1)探针蛋白的本质与相互作用蛋白的来源:探针蛋白的本质:是全长蛋白、相互作用相关的结构域,甚至是化学合成的较小的生物活性片段。相互作用蛋白的来源:已知内源性表达探针蛋白的细胞系是寻找与其相互作用蛋白的理想实验材料。
(2)细胞裂解物的制备:成功制备细胞粗提物的关键因素包括:细胞的裂解方式;pH的控制;温度;避免蛋白的降解。这些都需要在预实验中多次重复来优化细胞裂解条件。提取重组蛋白有时不必破碎细胞。例如,许多高表达的哺乳细胞系(尤其是中国仓鼠卵巢细胞,CHO细胞)和酵母细胞株已经被改造得可以分泌重组蛋白,因而可以直接从细胞条件培养基和培养滤出液中纯化重组蛋白。使用这些方法很重要的一点是要尽可能快地浓缩大量的细胞条件培养基,使之尽快进入“无蛋白酶的环境”。