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免疫共沉淀
2020年07月01日
免疫共沉淀是啥?免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation)是以抗体和抗原中间的专一性功效为基本的用以科学研究蛋白相互作用力的經典方式。是明确二种蛋白在详细体细胞内生理性相互作用力的合理方式。那麼,免疫共沉淀指的是什么?下边对于这一问题来开展简易的掌握和了解,期待以下几点对大伙儿有一定的协助!
当体细胞在非转性标准下被裂化时,详细体细胞内存有的很多蛋白-蛋白间的相互作用力被保存了出来。当用事先干固在argarosebeads上的蛋白A的抗原免疫沉淀A蛋白质,那麼与A蛋白质在身体融合的蛋白B也可以一起沉定出来。再根据蛋白质转性分离出来,对B蛋白质开展检验,从而证实二者间的相互作用力。
这类方式获得的目地蛋白质是在体细胞内与兴趣爱好蛋白质纯天然融合的,合乎身体具体情况,获得的結果真实度高。这类方式常见于测量二种总体目标蛋白是不是在身体融合;也可用以明确一种特殊蛋白的新的功效搭挡。
优势
(1)相互作用力的蛋白全是经汉语翻译后装饰的,处在纯天然情况;
(2)蛋白质的相互作用力是在当然情况下开展的,能够防止人为因素的影响;
(3)能够分离出来获得纯天然情况的相互作用力蛋白质一氧化氮合酶。
缺陷
(1)可能检验不上低感染力和一瞬间的蛋白-蛋白相互作用力;
(2)二种蛋白的融合可能并不是立即融合,而可能有第三者在中间起公路桥梁功效;
(3)务必在试验前预测分析目地蛋白是什么,以挑选最终检验的抗原,因此,若预测分析有误,试验就无法得到結果,方式自身具备冒险性。
(4)敏感度沒有亲和力色谱分析高。
常见问题
(1)保证溶胶凝胶法的蛋白质是由所添加的抗原沉定获得的,而并不是外源非特异蛋白质,单克隆抗体的应用有利于防止环境污染的产生;
(2)要保证抗原的特异性,即不在表述抗原体的体细胞溶解物中加上抗原后不容易造成溶胶凝胶法;
(3)明确蛋白质间的相互作用力是产生在体细胞中,而不是因为体细胞的融解才产生的,这需要开展蛋白的精准定位来明确。
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